IUB：3.4.24.3

膠原酶原料認(rèn)證 

粗膠原酶制劑含有兩種不同膠原酶的幾種同工型，一種巰基蛋白酶、梭菌蛋白酶、一種胰蛋白酶樣酶和一種氨肽酶。這種膠原蛋白水解和蛋白水解活性的組合可有效分解細(xì)胞間基質(zhì)，這是組織解離的重要部分。該復(fù)合物的一個(gè)成分是水解酶，它優(yōu)先在序列 Pro-Y-Gly-Pro 中的 Y-Gly 鍵處降解天然膠原蛋白中的螺旋區(qū)域，其中 Y 最常見的是中性氨基酸。這種切割產(chǎn)生對(duì)進(jìn)一步肽酶消化敏感的產(chǎn)物。粗膠原酶被半胱氨酸、EDTA 或鄰菲咯啉等金屬螯合劑抑制，但 DFP 不抑制。它也被一種大的血漿糖蛋白α2-巨球蛋白抑制。鈣2+是酶活性所必需的。每種膠原酶的特定酶譜已與從中獲得研究細(xì)胞的組織（或與放置細(xì)胞的用途）相關(guān)，并且作為相關(guān)性的結(jié)果，Worthington 已經(jīng)建立了幾種類型的粗膠原酶：類型 1、2、3 和 4。

• 1 型粗膠原酶具有膠原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶和胰蛋白酶活性的原始平衡。
• 2 型含有較高相對(duì)水平的蛋白酶活性，尤其是梭菌蛋白酶。
• 3 型含有低水平的二級(jí)蛋白酶。
• 4 型被設(shè)計(jì)成胰蛋白酶活性特別低，以限制對(duì)膜蛋白和受體的損害。
• 5 型 含有較高的膠原酶和酪蛋白酶值。
• 6 型 含有高膠原酶活性，酪蛋白酶與膠原酶的比例約為 2:1。設(shè)計(jì)為相對(duì)于 I 型 ( col  G)富含 II 型 ( col  H) 膠原酶。
• 7 型膠原酶和酪蛋白酶的活性比 1 型和 2 型膠原酶高四倍。

 •純化的膠原酶，代碼：CLSPA，含有最少的二次蛋白水解活性和高膠原酶活性。

Worthington 還提供預(yù)包裝形式的每種類型的 0.22µm 過(guò)濾制劑，用于直接重組和用于細(xì)胞分離和培養(yǎng)程序。酶類型和不同組織的有效性之間的相關(guān)性很好，部分原因是使用的可變參數(shù)。然而，大多數(shù)研究人員認(rèn)為粗膠原酶批次的組織分型是一項(xiàng)有價(jià)值的服務(wù)。Worthington 膠原酶和污染物檢測(cè)的詳細(xì)說(shuō)明可在Worthington 酶手冊(cè)中找到。此外，組織特異性參考和詳細(xì)的分離條件可以在Worthington 組織分離指南中找到。

膠原酶測(cè)定是Mandl的改進(jìn)，其中將膠原酶與天然膠原一起溫育5小時(shí)，并使用Moore and Stein, JBC, 176 , 367, (1948)比色茚三酮法測(cè)定膠原分解的程度。釋放的氨基酸以每毫克膠原酶微摩爾亮氨酸表示。

用途：粗膠原酶廣泛用于酶促原代細(xì)胞分離和組織解離程序。大多數(shù)研究人員要么使用粗制膠原酶制劑，例如 1、2、3 和 4 型，要么使用色譜純化的膠原酶（代碼：CLSPA）；后者通常與二級(jí)酶如彈性蛋白酶、透明質(zhì)酸酶等結(jié)合。為了獲得最佳結(jié)果，必須針對(duì)要解離的組織調(diào)整蛋白水解活性的精確混合。不同組織的類型和有效性之間的相關(guān)性很好，并且可能部分取決于使用參數(shù)和目標(biāo)以及批次間的差異。如需更多信息，請(qǐng)參閱膠原酶取樣程序信息。Worthington 還出版了組織分離指南它提供了有關(guān)用于這些應(yīng)用的酶的更多信息以及多種細(xì)胞和組織類型的具體參考。

單位定義：一個(gè)單位在 37°C、pH 7.5 下 5 小時(shí)內(nèi)從膠原蛋白中釋放 1 微摩爾 L-亮氨酸當(dāng)量

相關(guān)產(chǎn)品：

膠原蛋白 (CL)
脫氧核糖核酸酶 I (DP/D/DCLS/D2/DPFF/DPRF)
彈性蛋白酶 (ES/ESL/ESFF)
透明質(zhì)酸酶 (HSE/HSEP)
中性蛋白酶 (Dispase, NPRO)
木瓜蛋白酶 (PAP/PAPL/PAP2)蛋白酶 K (PROK)
胰蛋白酶 (TL/TRL/TRL3/TRLS/TRTPCK)
胰蛋白酶抑制劑 (LBI/OI/SI/SIC)

細(xì)胞分離優(yōu)化系統(tǒng) (CIT)
肝細(xì)胞分離系統(tǒng) (HIS)
新生兒心肌細(xì)胞分離系統(tǒng) (NCIS)
木瓜蛋白酶解離系統(tǒng) (PDS/PDS2)