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Nanolight H-腔腸素說(shuō)明書(shū)

Coelenterazine h

Cat＃301 Coelenterazine h

Coelenterazine h（天然Coelenterazine的2-脫氧衍生物）

比具有Apoaequorin的天然Coelenterazine高2倍的 初始光輸出。Renilla熒光素酶
降低但持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)。

化合物ID：	Coelenterazine h或2-Deoxycoelenterazine
CAS＃：	50909-86-9
IUPAC名稱：	2,8-二芐基-6-（4-羥基苯基）咪唑并[1,2-a]吡嗪-3（7H） - 酮
分子式：	C 26 H 21 N 3 O 2
MW：	407.5
結(jié)構(gòu)體：

熒光素作為過(guò)濾的，凍干的，分批控制的底物
以500μg等分試樣（1mg = 2×500μg）和5mg和10mg（2×5mg）等分試樣運(yùn)輸。

凍干熒光素的優(yōu)點(diǎn)是：

• 為每組實(shí)驗(yàn)預(yù)先分裝少量新鮮底物
• 保質(zhì)期長(zhǎng)（在氬氣下包裝）
• 由于其精細(xì)的晶體結(jié)構(gòu)，溶解速度更快
• 等分試樣之間的質(zhì)量始終如一

運(yùn)輸：通過(guò)FedEx或UPS在RT，隔夜或第二次發(fā)貨。儲(chǔ)存在-80 ° C。避光。

背景介紹

腔腸素（Coelenterazine）是自然界中資源豐富的天然熒光素，是絕大多數(shù)海洋發(fā)光生物（超過(guò)75%）的光能貯存分子。腔腸素可作為許多熒光素酶的底物，如海腎熒光素酶（Rluc），Gaussia分泌型熒光素酶（Gluc），以及包括水母發(fā)光蛋白（aequorin）和藪枝螅發(fā)光蛋白（Obelia）在內(nèi)的光蛋白（Photoproteins）。與甲蟲(chóng)（或螢火蟲(chóng)）熒光素/熒光素酶系統(tǒng)不同，腔腸素/熒光素酶系統(tǒng)不需要三磷酸腺苷（ATP），更便于體內(nèi)生物熒光的研究。因此，腔腸素常用作基于熒光分析的報(bào)告基因檢測(cè)以及活體動(dòng)物檢測(cè)的發(fā)光底物。

目前商業(yè)化的腔腸素應(yīng)用普遍的是天然腔腸素（Coelenterazine native），另外還有很多腔腸素衍生物如Coelenterazine h、Coelenterazine 400a、Coelenterazine cp、Coelenterazine f、Coelenterazine hcp、Coelenterazine n等被一一合成。理論上這些腔腸素可用于相同的實(shí)驗(yàn)，但是由于其發(fā)光波長(zhǎng)，細(xì)胞膜滲透性，光量子效率上的差異，使得其在相同應(yīng)用上表現(xiàn)出不同的實(shí)驗(yàn)效果。

腔腸素的種類

天然腔腸素（Coelenterazine Native）

也叫腔腸素游離酸，是海腎熒光素酶（Rluc）和Gaussia熒光素酶（Gluc）等多種熒光素酶的作用底物，也是水母發(fā)光蛋白的輔助因子。

產(chǎn)品應(yīng)用：檢測(cè)活細(xì)胞中鈣離子濃度、基因報(bào)告分析、BRET（生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移）研究、ELISA、HTS以及組織或細(xì)胞中ROS水平的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)等。

腔腸素h（Coelenterazine h）

是海腎熒光素酶（Rluc）和Gaussia熒光素酶（Gluc）等多種熒光素酶的作用底物，也是水母發(fā)光蛋白的輔助因子。

產(chǎn)品應(yīng)用：發(fā)光強(qiáng)度比天然腔腸素高10倍以上，適用于報(bào)告基因分析，活細(xì)胞中鈣離子濃度檢測(cè)。

腔腸素hcp（Coelenterazine hcp）

是天然腔腸素的衍生物之一。腔腸素hcp-水母發(fā)光蛋白復(fù)合物的熒光強(qiáng)度比天然腔腸素復(fù)合物高190倍，且量子產(chǎn)量高和Ca²⁺反應(yīng)速度快，非常適合用于鈣離子水平的檢測(cè)。

產(chǎn)品應(yīng)用：適合用于鈣離子水平的檢測(cè)。

腔腸素400a（Coelenterazine 400a）

天然腔腸素的衍生物之一，也稱為DeepBlue C^TM，是海腎熒光素酶（Rluc）的良好底物，其大發(fā)射波長(zhǎng)在400nm左右，對(duì)GFP受體蛋白的信號(hào)干擾小，不能被Gaussia分泌型熒光素酶（Gluc）氧化。

產(chǎn)品應(yīng)用：BRET（生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移）研究的優(yōu)先選擇腔腸素類底物

腔腸素f（Coelenterazine f）

與天然腔腸素結(jié)構(gòu)上的僅有差別在于將其R-1位酚基上的羥基替換成氟（F），是水母發(fā)光蛋白（aequorin）的優(yōu)先選擇底物。與天然腔腸素-水母蛋白（Apoaequorin）復(fù)合物產(chǎn)生的光子總數(shù)相比，此復(fù)合物僅產(chǎn)生80%的光子能。其優(yōu)點(diǎn)在于：僅需非常少的時(shí)間來(lái)生成aequorin復(fù)合物。當(dāng)其與Ca²⁺接觸，即可快速且高產(chǎn)量的發(fā)光，產(chǎn)能強(qiáng)度是天然腔腸素的20倍。另外其具有好的細(xì)胞滲透性。

產(chǎn)品應(yīng)用：當(dāng)需要*的Ca²⁺檢測(cè)靈敏度來(lái)研究水母蛋白再生實(shí)驗(yàn)，推薦使用本底物。

腔腸素cp（Coelenterazine cp）

是天然腔腸素的衍生物之一。其與水母蛋白（Apoaequorin protein）形成的光蛋白復(fù)合物的發(fā)光強(qiáng)度是天然腔腸素的15倍，且具有更快的Ca²⁺反應(yīng)速率。

產(chǎn)品應(yīng)用：可用于 G-蛋白偶聯(lián)受體(GPCRs)藥物的高通量篩選研究。

腔腸素n（Coelenterazine n）

所有的腔腸素衍生物中熒光強(qiáng)度是弱的，且對(duì)Ca²⁺反應(yīng)速率也明顯低于天然腔腸素。

腔腸素e（Coelenterazine e）

一種天然腔腸素衍生物，結(jié)構(gòu)上比天然腔腸素多了一個(gè)乙基。作為海腎熒光素酶的底物，其熒光強(qiáng)度是天然腔腸素的137%。腔腸素e具有高的體外水母發(fā)光蛋白反應(yīng)性，且具有雙發(fā)射峰（405& 465），從而可在pCa 5-7范圍內(nèi)通過(guò)雙波長(zhǎng)的比例測(cè)定Ca²⁺濃度，由于該法不依賴于腔腸素濃度，因此提高了檢測(cè)性。因該衍生物的細(xì)胞通透性較差，所以對(duì)于細(xì)胞內(nèi)相關(guān)實(shí)驗(yàn)則無(wú)此優(yōu)勢(shì)，。

產(chǎn)品應(yīng)用：非常有用的Ca²⁺低靈敏檢測(cè)底物。

二甲基腔腸素（Coelenterazine 2-methyl ）

是一種細(xì)胞強(qiáng)抗氧化劑，可作用于細(xì)胞內(nèi)的活性氧，如單態(tài)氧和超氧陰離子，而氧化應(yīng)激是細(xì)胞凋亡過(guò)程的中介環(huán)節(jié)，另外該化合物具有無(wú)毒、細(xì)胞膜通透性等特性，故可用于研究細(xì)胞凋亡。

產(chǎn)品應(yīng)用：1）作為研究細(xì)胞凋亡的重要工具；2）二甲基腔腸素還可通過(guò)化學(xué)發(fā)光法來(lái)檢測(cè)超氧陰離子和過(guò)氧亞硝酸陰離子水平。

Nanolight H-腔腸素使用方法：

Cat# 301 h-Coelenterazine Cas# 50909-86-9 MW 407.46

一般說(shuō)明：H-腔腸素（CTZ）是天然腔腸素的脫氫氧衍生物。
H-CTZ和其他類似物的研究可追溯到1989年，當(dāng)時(shí)生物化學(xué)雜志，作者：O.Shimomura博士（Biochem.J.1989年8月1日；261（3）；913-920）
已發(fā)布。
Shimomura博士、Musicki博士和Kishi博士合成了幾種不同的類似物coelenterazine和用這些代替了天然的柯侖他拉嗪來(lái)制造我們喜歡稱之為“帶電”的東西。
綠松石素，意思是當(dāng)分子被加上三個(gè)鈣原子在“彈出”時(shí)，基質(zhì)就可以發(fā)光了。合成的“半合成綠松石”對(duì)鈣有很高的敏感性，記錄了其發(fā)射動(dòng)力學(xué)以及總光子通量和光譜。
總結(jié)他們對(duì)h-ctz的發(fā)現(xiàn)；當(dāng)與自然發(fā)生或自然發(fā)生的比較時(shí)
coelenterazine，h-coelenterazine產(chǎn)生的初始光強(qiáng)度是總光強(qiáng)度的10倍。
產(chǎn)生的光子總數(shù)為82%。基本上，初的光輸出被壓縮，10倍的閃光強(qiáng)度在一個(gè)適度較短的上升時(shí)間被注意到。
讀者感興趣的可能是下面提到的類似物CTZ-F，其中氟取代了R環(huán)上的對(duì)羥基。這種替代產(chǎn)生18倍的強(qiáng)度
與本地相比，上升時(shí)間非常短，與本地相比，總通量為80%。 

請(qǐng)注意：光蛋白與熒光素酶有明顯不同。H-CTZ和CTZ-F可能與Renilla熒光素酶一起使用，但兩者都不能與Gaussia熒光素酶一起使用。

作為綠松石素底物的腔四嗪類似物：

作為Renilla熒光素酶底物的coelenterazine類似物：

貯存和貯存壽命：*干燥的H-腔四嗪粉末在密閉管中相當(dāng)穩(wěn)定，在-20℃或更低溫度下貯存，避光。為了達(dá)到宜效果，將任何CTZ的表面積保持在低限度，并使用氬防止自動(dòng)氧化。
稀釋：在用于所有光度計(jì)分析或?qū)嶒?yàn)之前，應(yīng)立即制備新鮮的“增溶”溶液。如果您使用CTZ作為篩選工具，對(duì)于多個(gè)井或多個(gè)板閱讀器，請(qǐng)組成一個(gè)非常集中的庫(kù)存解決方案CTZ。+
酒精或丙二醇（可選擇口味），然后應(yīng)將溶解的CTZ添加到水緩沖液中（宜：脫氣）。這個(gè)解決方案是什么應(yīng)該進(jìn)入你的光度計(jì)泵水庫(kù)。
如果在動(dòng)物研究中使用，我們建議使用我們的優(yōu)化注射A-lume產(chǎn)品cat.301-inj。

當(dāng)執(zhí)行多板閱讀器分析時(shí)，您想比較RLU
結(jié)果在96或更多板塊的口井和后一口井之間，請(qǐng)注意
CTZ將在水溶液中持續(xù)氧化（見(jiàn)下圖，使用兩種廣泛使用的緩沖液進(jìn)行）。
用于適當(dāng)?shù)臅r(shí)間相關(guān)控件，以便能夠比較結(jié)果。